O método SDS-PAGE (sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis)

É método mais utilizado em análise qualitativa de proteínas. O gel de poliacrilamida funciona como uma malha porosa na separação das proteínas considerando sua massa e carga. O tamanho do poro é controlado pelo percentual de Acrylamide/Bis-acrylamide utilizado para o preparo do gel. As condições de preparação podem ser otimizadas de forma a se adequar com a mostra a ser analisada.

Reagentes usados na técnica SDS-PAGE

Nossos reagentes são adquiridos com alto grau de pureza com certificados de analises, além do uso de água ultrapura de forma a conferir total qualidade à analise por SDS-PAGE. Os padrões de proteínas aplicados em nossas análises abrangem uma faixa entre 200 a 10 k Da, podendo ser usados para determinar uma grade variedades de proteínas.

Revelação do gel

Empregamos dois tipos de revelação para proteínas separadas no gel. A primeira por impregnação com prata e utilizado o corante Comassie Brilliant Blue RG-250. O método escolhido pode ser avaliado para cada tipo de amostras, considerando o teor de proteína da amostra. As vantagens são:

• Coloração com Comassie Brilliant Blue RG-250 - Limite de detecção ~0,1-1,0 μg de proteína
• Impregnação por Prata (2000 x mais sensível) - Limite de detecção ~0,01-0,1 μg de proteína

Análise dos resultados

O fingerprint das proteínas constituintes da amostra é determinada qualitativamente. Os géis são fotografados e aplicados no software GelAnalyzer, e determinadas as massas em kDa pela curva de calibração obtidas por um conjunto de proteínas purificadas.

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